问题 | 可能原因 | 解决方案 |
荧光素酶活性值偏低 | 细胞转染效率低，Renilla luciferase表达水平偏低。 | 增强细胞转染效率，或更换成转染效率较高的细胞株，如293T细胞。 |
细胞裂解产物使用量偏少 | 增加检测体系中的细胞裂解产物用量。 |
细胞裂解不充分。 | 请用配制的1×细胞裂解液裂解细胞30 min，裂解过程中不断震荡。 |
荧光素酶活性检测试剂失效。 | 请正确保存和使用试剂盒。 |
荧光素酶活性检测试剂反复冻融。 | 请尽量使用新鲜配制的海肾荧光素活性检测试剂，暂时不用的置于-80 ℃存放，避免反复冻融。 |
重复测量的海肾荧光素酶活性值偏差大 | 样品和检测试剂未平衡到室温。 | 提前取出待测样品，并配制海肾荧光素酶检测试剂，避光放置几分钟，平衡到室温后再检测。 |
样品加样量不准。 | 使用精确度较高的移液器，保证加样量，混合次数及间隔时间一致。 |
检测底物不是同一批次配制的底物 | 反复冻融降低检测试剂的灵敏度，因此，检测同一样品时，使用同一批次配制，且没有反复冻融的海肾荧光素酶活性检测试剂。 |
荧光素酶活性值偏高 | 细胞转染效率高，luciferase表达量高。 | 减少细胞裂解产物用量，或用1×细胞裂解液稀释细胞裂解产物后再测定。 |
细胞裂解产物用量偏大。 | 减少测定体系中的细胞裂解产物用量。 |
